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穩定細胞株篩選步驟
日期:2025-06-15 10:48
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摘要:
穩定細胞株篩選步驟:
1.構建攜帶目標基因的載體
首先,需要將目標基因克隆到攜帶有選擇標記的載體中,例如含有抗生 素抗性基因的質粒。然后將該載體轉染到目標細胞中。
2.選擇標記篩選
轉染后的細胞需要在含有抗生 素的培養基中進行篩選。只有成功轉染的細胞才能夠在含有抗生 素的培養基中生長。
3.穩定細胞株的篩選
在完成了選擇標記篩選后,需要對細胞進行進一步的篩選,以得到穩定的細胞株。這可以通過對細胞進行單克隆分離來實現。具體地,將轉染后的細胞在...
穩定細胞株篩選步驟:
1.構建攜帶目標基因的載體
首先,需要將目標基因克隆到攜帶有選擇標記的載體中,例如含有抗生 素抗性基因的質粒。然后將該載體轉染到目標細胞中。
2.選擇標記篩選
轉染后的細胞需要在含有抗生 素的培養基中進行篩選。只有成功轉染的細胞才能夠在含有抗生 素的培養基中生長。
3.穩定細胞株的篩選
在完成了選擇標記篩選后,需要對細胞進行進一步的篩選,以得到穩定的細胞株。這可以通過對細胞進行單克隆分離來實現。具體地,將轉染后的細胞在96孔板中進行單克隆分離,每個孔只保留一個細胞。然后,通過檢測細胞株的表達水平和穩定性,篩選出較佳的穩定細胞株。