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普通PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR不同之處
普通PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR二者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，都能說明生物體外的特殊DNA復(fù)制的整個(gè)過程的擴(kuò)增效率和溶解溫度情況。但是二者也有以下不同之處。
1、二者系統(tǒng)組成不同
熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。
2、二者原理不同
熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通OCR通過檢測插入DNA中核算染料的量來測定PCR終產(chǎn)物量。
3、二者反應(yīng)要求不同
熒光定量PCR對(duì)擴(kuò)增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通PCR可以擴(kuò)增長點(diǎn)的片段。
4、二者應(yīng)用不同
熒光定量PCR主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的，普通的PCR儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段，定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作，反之不行。
5、二者測量成本不同
定量PCR儀價(jià)格較為昂貴，普通的基因擴(kuò)增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。但是價(jià)格要低很多，而且運(yùn)行成本也要低很多。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。