產品名稱	4T1+luc細胞
規格	詳見說明書
貨號	BH-8010746

細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。

①細胞核、染色體以及基因表達的研究。

②生物膜與細胞器的研究。

③細胞骨架體系的研究。

④細胞增殖及其調控。

⑤細胞分化及其調控。

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。

⑦細胞的起源與進化。

⑧細胞工程。

實驗報告：

一、分離與培養：

    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、熒光鑒定：

    1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。 

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

AIM2 英文名稱： 干擾素誘導蛋白AIM2抗體  0.1ml

Aquaporine 2 英文名稱： 水通道蛋白-2抗體  0.1ml

ABI2 英文名稱： 腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結合蛋白抗體  0.1ml

ARL11 英文名稱： ADP核糖基化因子樣11抗體  0.2ml

ARMCX3 英文名稱： ARM重復X連鎖蛋白ARMCX3抗體  0.2ml

ARMCX1 英文名稱： ARM重復X連鎖蛋白ARMCX1抗體  0.2ml

ARMCX2 英文名稱： ARM重復X連鎖蛋白ARMCX2抗體  0.2ml

Apg10 英文名稱： 自噬相關蛋白10抗體  0.2ml

ACBD6 英文名稱： 酰基輔酶A結合結構域蛋白6抗體  0.2ml

Aminoacylase 1 英文名稱： 氨基酰化酶1抗體  0.2ml

Adipose Triglyceride Lipase 英文名稱： 脂肪甘油三酯脂酶抗體  0.1ml

phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱： 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體  0.1ml

Amphiregulin 英文名稱： 雙調蛋白（結腸直腸細胞源性生長因子）抗體  0.1ml

phospho-AQP2(Ser264) 英文名稱： 磷酸化水通道蛋白2抗體  0.1ml

AXL 英文名稱： 粘附相關激酶抗體  0.1ml

phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 英文名稱： 磷酸化粘附相關激酶抗體  0.1ml

phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶B抗體  0.1ml

D-天冬氨酸

英文名稱：D-Aspartic acid；(R)-Aminosuccinic acid；(R)-2-Aminosuccinic acid；D-Asparaginic Acid；H-D-Asp-OH

其他名稱：D-天門冬氨酸；D-天冬酸；D(-)氨基丁二酸；D(-)氨基琥珀酸；二胺基丁二酸

CAS號：1783-96-6

C4H7NO4=133.10

級別：BR

含量：≥99.0%

比旋光度：-24～-26o

PH：2.5～3.5

氯化物：≤0.02%

銨鹽：≤0.02%

鐵鹽：≤10ppm

砷鹽：≤1ppm

重金屬：≤10ppm

干燥失重：≤0.1%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結晶粉末。溶于熱水和稀鹽酸，微溶于冷水，不溶于乙醇和乙迷。相對密度(d1313)1.6613

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途

保存：RT

DL-天冬氨酸

英文名稱：DL-Aspartic acid；(±)-2-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid

其他名稱：DL-天門冬氨酸；DL-天門酸；DL-氨基琥珀酸；DL-2-氨基丁二酸；DL-天冬酸；DL-氨基丁二酸

CAS號：617-45-8

C4H7NO4=133.10

級別：BR

含量：≥99.0%

鑒別：合格

PH：2.7～3.3

干燥失重：≤0.20%

硫璜灰：≤0.10%

銨鹽：≤100ppm

氯化物：≤100ppm

硫酸鹽：≤200ppm

重金屬：≤10ppm

砷鹽：≤1ppm

鐵鹽：≤3ppm

天冬酰胺酸：≤0.10%

4T1+luc細胞氮含量：10.4～10.6%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結晶粉末。微溶于水，不溶于乙醇及乙迷。相對密度(d12.512.5) 1.6632。熔點338～339℃(278～280℃)

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。微生物培養基

保存：RT

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等； 

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。