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產品名稱 |
4T1+luc細胞 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 |
BH-8010746 |
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
AIM2 英文名稱: 干擾素誘導蛋白AIM2抗體 0.1ml
Aquaporine 2 英文名稱: 水通道蛋白-2抗體 0.1ml
ABI2 英文名稱: 腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結合蛋白抗體 0.1ml
ARL11 英文名稱: ADP核糖基化因子樣11抗體 0.2ml
ARMCX3 英文名稱: ARM重復X連鎖蛋白ARMCX3抗體 0.2ml
ARMCX1 英文名稱: ARM重復X連鎖蛋白ARMCX1抗體 0.2ml
ARMCX2 英文名稱: ARM重復X連鎖蛋白ARMCX2抗體 0.2ml
Apg10 英文名稱: 自噬相關蛋白10抗體 0.2ml
ACBD6 英文名稱: 酰基輔酶A結合結構域蛋白6抗體 0.2ml
Aminoacylase 1 英文名稱: 氨基酰化酶1抗體 0.2ml
Adipose Triglyceride Lipase 英文名稱: 脂肪甘油三酯脂酶抗體 0.1ml
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 0.1ml
Amphiregulin 英文名稱: 雙調蛋白(結腸直腸細胞源性生長因子)抗體 0.1ml
phospho-AQP2(Ser264) 英文名稱: 磷酸化水通道蛋白2抗體 0.1ml
AXL 英文名稱: 粘附相關激酶抗體 0.1ml
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 英文名稱: 磷酸化粘附相關激酶抗體 0.1ml
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml
D-天冬氨酸
英文名稱:D-Aspartic acid;(R)-Aminosuccinic acid;(R)-2-Aminosuccinic acid;D-Asparaginic Acid;H-D-Asp-OH
其他名稱:D-天門冬氨酸;D-天冬酸;D(-)氨基丁二酸;D(-)氨基琥珀酸;二胺基丁二酸
CAS號:1783-96-6
C4H7NO4=133.10
級別:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:-24~-26o
PH:2.5~3.5
氯化物:≤0.02%
銨鹽:≤0.02%
鐵鹽:≤10ppm
砷鹽:≤1ppm
重金屬:≤10ppm
干燥失重:≤0.1%
性狀(以下信息僅供參考):白色結晶粉末。溶于熱水和稀鹽酸,微溶于冷水,不溶于乙醇和乙迷。相對密度(d1313)1.6613
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途
保存:RT
DL-天冬氨酸
英文名稱:DL-Aspartic acid;(±)-2-Aminosuccinic acid;DL-2-Aminobutanedioic acid;DL-Aminosuccinic acid;DL-2-Aminobutanedioic acid;DL-Aminosuccinic acid
其他名稱:DL-天門冬氨酸;DL-天門酸;DL-氨基琥珀酸;DL-2-氨基丁二酸;DL-天冬酸;DL-氨基丁二酸
CAS號:617-45-8
C4H7NO4=133.10
級別:BR
含量:≥99.0%
鑒別:合格
PH:2.7~3.3
干燥失重:≤0.20%
硫璜灰:≤0.10%
銨鹽:≤100ppm
氯化物:≤100ppm
硫酸鹽:≤200ppm
重金屬:≤10ppm
砷鹽:≤1ppm
鐵鹽:≤3ppm
天冬酰胺酸:≤0.10%
4T1+luc細胞氮含量:10.4~10.6%
性狀(以下信息僅供參考):白色結晶粉末。微溶于水,不溶于乙醇及乙迷。相對密度(d12.512.5) 1.6632。熔點338~339℃(278~280℃)
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途。微生物培養基
保存:RT
細胞培養的優點:1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。