實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無**、支原體污染。 細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產品僅用于科學研究

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個 
4、培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺； 

培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
培養操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

2-Tetradecylcyclobutanone Telmisartan - 純品型，10mg 特征形態 固態

Tetradecylamine，certified 標準品 2,4,5-Trichlorophenol 2016-42-4 純品型，0.25G 特征形態 固態

1-十四烯 標準品 O,S-TEPP 1120-36-1 純品型，1ML 特征形態 固態
Pyr-Trp-OH  Cyclo(Phe-Trp)  Cyclo(Gly-Ser)  Cyclo(D-Ala-Pro)  (Tyr0)-C-Peptide (human)

Diprotin A  Cyclo(Phe-Ser)  Cyclo(Gly-Pro)  Cyclo(Ala-His)  C-Peptide (human),Insulin Precursor (57-87) (human)

Diprotin B  Cyclo(Phe-Pro)  Cyclo(Gly-Phe)  Cyclo(Ala-Gly)  (Tyr0)-C-Peptide (dog)

Cyclo(Val-Val)  Cyclo(Phe-Phe)  Cyclo(Gly-His)  Cyclo(Ala-Glu)  C-Peptide (dog)

Dendroaspis Natriuretic Peptide  Retrocyclin-1  GGHG  Human CMV pp65 (495-503)  Cortistatin-17 (human)
吲哚(standard for GC,>99.5%(GC))  Indole  質量規格：standard for GC,>99.5%(GC) 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit

辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))  Ethyl octanoate  質量規格：Standard for GC,>99%(GC) 人Ⅰ型膠原C端肽(ICTP)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen,ICTP ELISA Kit

異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC))  2-Ethyl-1-hexanol  質量規格：standard for GC, ≥99.5% (GC) 人Ⅰ型膠原N末端肽(X)試劑盒 Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,X ELISA Kit

棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))  Ethyl palmitate  質量規格：standard for GC,≥99%(GC) 人Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽(CTX-I)試劑盒 Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-I ELISA Kit

MAEC細胞異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))  2-Ethylhexanoic acid  質量規格：Standard for GC,≥99.5%(GC) 人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)試劑盒 Human cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit

茴香醛(分析標準品,>99%(GC))  p-Anisaldehyde  質量規格：分析標準品,>99%(GC) 人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)試劑盒 Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit

己二酸二異辛酯(標準品)  Bis(2-ethylhexyl)adipate  質量規格：分析標準品 人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit

分散藍 35(標準品)  Disperse Blue 35  質量規格：分析標準品 人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6/MUC1)試劑盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit

9-甲基蒽(標準品)  9-Methylanthracene  質量規格：分析標準品 人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit

二甲四氯(標準品)  MCPA  質量規格：分析標準品 人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
收到如何處理:
1、首先，觀察培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。