細胞介紹：

中耳由三個聽骨（砧骨、錘骨和鐙骨）、鼓膜和咽鼓管組成。中耳的功能是將聲能從鼓膜轉移到耳蝸。中耳上皮細胞 在中耳的穩態和不育中起著重要作用。與meepic相關的異常可導致中耳ji病的發展，如中耳炎和膽脂瘤。有證據表明上皮細胞增殖是膽脂瘤的根本原因。近的研究也表明，上皮細胞的異常增殖可能與中耳成纖維細胞產生的炎癥因子有關。人meeepic是研究中耳ji病的一種有效的體外模型，可用于中耳炎和膽脂瘤zhi療的新靶點。

公司所有產品均不得用于臨床診斷，僅可用于工業或科研等非醫療目的。

細胞特性：

1) 細胞來源于實驗動物的正常中耳組織。
2) 細胞鑒定：廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)免yi熒光染色為陽性。
3) 經鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細jun、酵母和真jun。
5) 細胞生長方式：上皮樣細胞，貼壁培養。

推薦使用 delf原代 上皮 細胞培養體系 作為該細胞的培養試劑。

操作步驟如下：

1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附的結締組織等非培養所需組織。再次清洗后，用手術刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當的緩沖液再清洗一次。
2、消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3、培養：細胞懸液用計數板進行細胞計數。用培養液將細胞數調整為（2～5）×105 cells／ml，或實驗所需密度，分裝于培養瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養瓶底部為宜。置CO2培養箱內，5％CO2，37℃靜置培養。一般3～5d，原代培養細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養液量1／2的新培養液，繼續培養2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

注意事項：

1)原代培養的分離細胞在初次接觸體外環境時，雖然被分散成單個細胞，但它們之間的互相影響還是存在的， 而且這種影響對細胞能否存活是非常重要的。在這些細胞之間能產生一些促生長的活性物質， 使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低， 細胞之間的促生長作用很小， 雖然營養物質很充足， 也很難使細胞適應從體內的組織環境到被分散后進入獨立生存環境的變化過程。 如果接種的細胞密度過大，會導致營養物質供應不足， 代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。
2)原代培養時初始培養在組織分散和分離細胞時細胞可能會受到嚴重的損傷。適當增大原代培養接種的細胞密度， 給培養的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用， 會極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環境后進行傳代培養時再以較低的密度接種和培養。
3)由于細胞之間的相互的內在聯系被打破，分離細胞在體外培養時經歷的生存環境改變很大，在體外存活和生長的難度相應增加。 對于貼壁依賴性細胞來說，盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養 3h 到 5h，由于細胞懸液中帶有少量培養液， 細胞即可以維持存活， 又可以很快接觸到培養瓶底壁， 是細胞迅速黏附于底物，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。
3、分離細胞培養法—懸浮型細胞培養 。

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